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高效液相色谱系统的维护与保养

发布时间:2018-07-02 16:01:30 作者: 点击数:

一.  流动相

保持贮液瓶清洁,定期清洗或更换;尽量使用HPLC级溶剂和试剂;含有缓冲盐和非HPLC级的流动相一定要过滤;含有缓冲盐的流动相应现用现配,防止微生物生长和组分改变。

 

1、更换流动相注意事项:

高效液相色谱常用的流动相包括多种有机溶剂、水、各种缓冲溶液等,它们之间存在互溶性的问题,同时也存在缓冲溶液盐析出的问题。

 

2、更换互溶性流动相将新流动相置于储液瓶中:

a. 打开放空阀,启动泵使新的流动相从放空阀出口流出20mL左右。

b. 关闭放空阀,然后将进样阀与色谱柱相连接端卸开,用小容器放置于进样阀的出口处。

c. 启动恒流泵,让流动相从进样阀出口流出10mL左右。

d. 重新连接色谱柱,设定适当流速,当流动相流出约30倍于色谱柱体积,并且检测器基线平衡后,流动相更换完毕。

 

3、更换非互溶性流动相:

a. 用中介溶剂更换泵中的旧流动相(不要接色谱柱)。

b. 如果色谱柱中流动相也需要更换,用该溶剂冲洗色谱柱。

c. 用新流动相更换中介溶剂。

 

4、更换缓冲液流动相:

a. 用5%~20%甲醇水更换色谱系统中缓冲液(包括色谱柱) 。(非常重要)

b. 用新流动相更换过渡溶剂。

c. 由于一般缓冲液遇到甲醇、异丙醇等高含量有机溶剂混合液时容易将缓冲液中的盐结晶出来,而结晶盐对密封圈、柱塞杆以及进样阀内部转子和定子都有很大的损坏,也容易阻塞输液管路,因此要特别仔细操作。

d. 用缓冲液作流动相或一段时间不使用泵,照以上步骤更换溶剂,然后用纯甲醇或乙腈冲洗。

 

 

二. 泵头

 

泵的密封圈是泵最容易磨损的部件

 

1、泵的密封圈的维护保养:

每天要把泵中的缓冲液冲洗干净,防止盐沉积;用HPLC级试剂;用烧结不锈钢吸液过滤头;

 

2、进样阀

最易磨损:转子密封

 

3、保养事项:

a、样品进样前要过滤;

b、停机后要用溶剂冲洗干净进样器内残留样品和缓冲盐;

c、不要用气相色谱用的尖头针进样。

 

 

4.  检测器

保持检测器清洁,每天与色谱柱一同清洗;

用脱过气的流动相,防止空气卡在检测池内;

检测器灯有一定寿命,不用时不要打开灯。但也不能

够经常开关灯。

 

 

三、高效液相系统常见故障排除方法

1、泵易出现的问题:

泵流速变小、柱压低或不吸液流量不稳或压力不稳漏液压力显示过高;泵流速变小、柱压低的原因泵内有气泡;溶剂过滤器阻塞;入口单向阀过滤片阻塞;泵中两种溶剂不互溶;柱塞密封泄漏;连接管路泄漏。流量不稳或压力不稳的原因泵头内聚集了气泡;泵中溶剂分层;泵头失灵;入口单向阀污染;输液管路漏液或部分堵塞。

 

2、漏液的原因

流动相从主副泵头清洗管流出:由于密封圈内环表面和柱塞杆表面粘有异物;流动相从泵头和定位套间漏液:密封圈外环密封不好;连接问题。

 

3、泵压力显示过高的原因

在线过滤器堵塞;进样阀堵塞;色谱柱本身压力增高;紫外检测器入口管路堵塞。

 

4、泵中气泡的排除

初次、长时间没有使用、流动相脱气效果不好等情况下系统内会出现气体,导致压力不稳、流速不稳甚至不能输液等问题。输液管中的气泡可通过用泵的冲洗功能或者用注射器在放空阀排出;如果输液管中无气泡,流路中仍然无液体流出,可能是阀球阀座粘连,取出单向阀,向单向阀两端分别吹气,一通一堵为正常,两端均堵说明阀球阀座粘连,需清洗阀球阀座。

 

5、在线过滤器及滤头的清洗

将在线过滤器和滤头拆下,浸入20-30%硝酸溶液中,超声30分钟,取出用水洗净既可。如果使用的是正相系统,注意将在线过滤器烘干后使用。

 

6、对柱塞杆的清洗

注意经常用蒸馏水冲洗柱塞杆后部的管路,避免盐结晶在上面,从而损伤密封圈和柱塞杆,导致泵体漏液。

 

7、单向阀清洗

取下密封垫,将阀球、阀座、限位套倒入盛乙醇的小烧杯中在超声波清洗器清洗阀组件(用放大镜观察清洗后的阀球、阀座,如果有损坏,请换新的阀球、阀座);清洗后将阀件按要求装入阀体(注意每组阀座的方向),在上面压住密封垫圈。每组阀球、阀座不能互换,否则影响密封性能。阀组装好后,可用吹气的方法检查安装的是否正确。从标记环一端吹气,空气可以通过阀体,而在另一端吹气,空气应无法通过阀体。

 

8 、检测时易出现的问题

a. 基线噪声

b. 基线漂移

c. 工作站出现大的尖峰

d. 负峰

e. 工作站信号阶梯式上升

f. 随泵运动出现噪声

g. 峰高或者峰面积重复性差

h. 分析准确度差

 

9、基线噪音

样品或检测池污染;样品或参比池中有气泡;记录仪或装置接地不良;检测器光源故障;连接件泄露;很小的气泡通过检测池;由泵的脉动引起的规则脉冲;有微粒通过检测池;进样阀样品环部分堵塞;氘灯寿命到限。

 

 

10、基线漂移

检测池污染;检测池内小气泡;柱污染或固定相流失;检测器温度变化;检测器光源故障;原先的流动相未完全置换;溶剂储瓶污染;强吸附的组分从色谱柱中洗脱下来;微粒造成进样阀柱头部分堵塞;溶剂分层。出现很大的尖峰检测池内有气泡通过-溶剂脱气并彻底冲洗系统;检查连接系统是否漏液;记录仪或检测器接地不良-消除噪声来源;确保良好接地;样品溶解不彻底-更换样品溶剂。

 

 

四、负峰

检测器输出信号的极性相反;样品的吸收小于流动相,流动相不纯;样品溶剂干扰;示差折光检测器中样品的折射率较低;进样中带入气泡。

 

1、信号阶梯式上升

检测器的输出范围设定不当-重新设定检测器的输出范围。记录仪或检测器接地不良-确保良好接地。吸收过大,平头峰-稀释样品。

 

2、基线随着泵的往复出现噪音,仪器处于强空气中或流动相脉动,改变仪器放置位置,放在合适的环境中。用一调节阀或阻尼器以减少泵的脉动。

 

3、峰高或峰面积重复性差

进样体积不重复-保证完全充满定量管;检测器响应不正常;记录仪或工作站不正常;柱或检测器被样品超载;校准液或样品溶液或内标物分解;保留时间不重复;溶质与固定相作用;色谱柱填充不良。

 

4、 分析的准确度差

校准不适当;校准液或样品溶液或内标物分解;对内标物或欲测组分有未知干扰;溶质与固定相作用。

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