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液相色谱仪原理:高效液相色谱仪原理用途及常见故障处理

发布时间:2018-07-06 10:51:19 作者: 点击数:

高效液相色谱仪原理用途及常见故障处理

     试验室中用到的测试仪很多,高效液相色谱仪就是其中的一种,该仪器是在高效高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送。下面小编就为大家分享一下高效液相色谱仪原理与用途、特点与故障原因及处理的知识。

高效液相色谱仪的工作原理及用途

储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

 

1.环境分析中的应用:可应用于环芳烃、农药残留分析等。

 

2.食品分析中的应用:可应用于食品营养成分分析、食品添加剂分析、食品污染物分析等。

 

3.生命科学中的应用:可在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学及生化领域的分子量物质纯化、分离和测定等。

 

4.医学检验中的应用:体液中代谢物测定、药代动力学研究、临床药物监测等的分析测定。

 

5.无机分析中的应用:阴、阳离子的分析等。

 

 

高效液相色谱仪常见故障处理

 

故障1:流动相内有气泡,关闭泵,打开排空阀,按PURGE键清洗脱气,气泡不断的从过滤器冒出,进入流动相,无论打开PURGE键几次,都无法清除不断产生的气泡。

 

原因:

 

过滤器长期沉浸于水液内,过滤头内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅的通过过滤头,空气在泵的压力下经过过滤器进入流动相.处理过滤头浸泡在5%的硝酸溶液内,超声清洗十五分钟即可;亦可将过滤头浸泡在5%的硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开排空阀,打开PURGE键清洗脱气如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡在5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团以被硝酸破坏,流动相可以流畅的通过过滤器,打开排空阀,打开泵流速调治1.0~3.0mL/min,纯水冲洗过滤器1小时左右,即,可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。

 

故障2:柱压高;

 

原因:

 

(1)缓冲液盐份如,乙酸铵等,沉积柱内;

 

(2)样品污染沉积:

 

处理对于第一种情况先用40~50度的纯水,低速正向冲洗柱子待柱压逐渐下降后,相应的提高流速冲洗柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟,对于第2种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇[4+6]冲洗柱子[冲洗时间的长短由样品的污染情况而定],在用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗,正向冲洗柱子30分钟以上。

 

 

       故障3:既无压力指示又无液体流过

 

   原因:

 

1.泵密封垫圈磨损;

 

2.大量气体进入泵体:

 

处理对于第一种情况,更换密封垫圈,对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50mL的玻璃针筒在泵的出口处不帮助抽出空气。

 

故障4:压力波动大,流量不稳定。

 

原因:

 

系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间家有异物,使得两者不能密封;

 

处理:工作中注意流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气,如,为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

 

故障5:出峰不准,峰分叉。

 

 

原因:

 

(1)色谱柱被污染;

 

(2)柱头填料塌陷:

 

处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后,再用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上,如,冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷,去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与助内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。

 

故障6:峰面积重复性不佳。

 

原因:

 

(1)进样阀漏夜;

 

(2)加样针不到位:

 

处理:

 

对于第一种情况更换进样垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速,平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常生活中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲溶液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱住的使用寿命,同时,避免注射过量浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱住作好标记,用于不同分析目的的色谱住不要混用等。

 

上文的知识就是小编为大家分享的高效液相色谱仪原理与用途、特点与故障原因及处理方法,希望大家可以有所收获。高效液相色谱仪在使用的过程中会出现很多的问题,如果操作者可以了解故障的原因,就可以很好的去预防和排除这些故障,并且可以为正确使用该仪器使其发挥出最大的性能。

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