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液相色谱仪使用:高效液相色谱仪实验操作内容与原理

发布时间:2018-07-16 10:10:35 作者: 点击数:

高效液相色谱仪实验内容和原理:

储备器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)中;由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附—解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分配成单个祖坟依次从柱内流出,经过哦检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。


高效液相色谱仪实验操作内容与原理

 

在适宜的条件下,高效液相色谱仪可分离溶液中不同的组分,样品进高效液相色谱仪,经反相C\18液相色谱分离后,以色谱峰的保留时间定性,利用色谱峰面积在一定范围内与浓度成线性关系进行定量。本实验采用内标法,用β-胡萝卜素标准品分析未知浓度的类胡萝卜素产物的相关含量。

 

高效液相色谱仪实验操作步骤:

 

1、样品和标准品溶解和过滤:用丙酮作溶剂,溶解β-胡萝卜素标准品和类胡萝卜素样品。用滤膜(0.45um)过滤,备用。

 

2、开机,依次通过各分离单元、检测器、计算机电源。

 

3、流动相脱气,确认所有溶剂管路都充满溶剂。

 

4、启动溶剂管理系统,冲洗自动进样器和进样针,装入样品和转盘,编辑分析方法及执行样品分析表。

 

5、样品测定:色谱条件,色谱柱(C18,4.6mm*250mm,5um);流动相,甲酸;乙腈;异丙醇=5:4:1(v/v);流速 1ml/min;检测波长,480nm。

 

单位内标法定量:取混合使用液20ul注入高效液相色谱仪进行分离。记录各个峰的峰面积。按下式计算相对含量。

q样品=(q标准品*A样品)/A标准品

 

6、关机,使用完毕后,按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫,关闭电源开关。数据采集完毕后,关闭紫外检测器电源开关。处理数据后,关闭计算机电源开关,并做使用登记。


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